Öýjük medeniýetiniň esasy artykmaçlyklaryndan biri, öýjükleriň köpelmeginiň fiziki himiýasyny (ýagny temperatura, pH, osmotik basyş, O2 we CO2 dartyş) we fiziologiki gurşawy (ýagny gormon we ýokumly konsentrasiýa) dolandyrmak ukybydyr.Temperaturadan başga-da, medeni gurşaw ösüş gurşawy tarapyndan dolandyrylýar.
Medeniýetiň fiziologiki gurşawy fiziki we himiki gurşawy ýaly aýdyň bolmasa-da, zardyň düzüm böleklerine has gowy düşünmek, köpelmek üçin zerur ösüş faktorlaryny kesgitlemek we medeniýetdäki öýjükleriň mikro-gurşawyna has gowy düşünmek.(Cellagny öýjük-öýjükleriň özara täsiri, gazyň ýaýramagy, matrisa bilen täsir) indi käbir öýjük çyzyklaryny serumsyz metbugatda ösdürmäge mümkinçilik berýär.
1. Medeniýet gurşawy öýjükleriň ösmegine täsir edýär
Öýjük medeniýeti şertleriniň her öýjük görnüşi üçin tapawutlydygyny ýadyňyzdan çykarmaň.
Belli bir öýjük görnüşi üçin zerur bolan medeni şertlerden daşlaşmagyň netijeleri, adaty bolmadyk fenotipleriň aňlatmagyndan öýjük medeniýetiniň doly şowsuzlygyna çenli.Şonuň üçin sizi gyzyklandyrýan öýjük çyzygy bilen tanyş bolmagyňyzy we synagyňyzda ulanýan her önümiňiz üçin berlen görkezmeleri berk berjaý etmegiňizi maslahat berýäris.
2. Öýjükleriňiz üçin optimal öýjükli medeniýet gurşawyny döretmek üçin seresaplyklar:
Medeniýet serişdeleri we serum (has giňişleýin maglumat üçin aşakda serediň)
pH we CO2 derejeleri (has giňişleýin maglumat üçin aşakda serediň)
Plastmassa ösdürip ýetişdiriň (has giňişleýin maglumat üçin aşakda serediň)
Temperatura (has giňişleýin maglumat üçin aşakda serediň)
2.1 Medeni metbugat we serum
Medeniýet gurşawy, medeni gurşawyň iň möhüm bölegidir, sebäbi öýjükleriň ösmegi üçin zerur iýmitleri, ösüş faktorlaryny we gormonlary üpjün edýär we medeniýetiň pH we osmotik basyşyny kadalaşdyrýar.
Öýjük medeniýeti boýunça ilkinji synaglar dokumanyň ekstraktlaryndan we beden suwuklyklaryndan alnan tebigy medianyň kömegi bilen geçirilen hem bolsa, standartlaşdyrmagyň zerurlygy, mediýanyň hili we islegiň ýokarlanmagy kesgitli metbugatyň ösmegine sebäp boldy.Köpçülikleýin habar beriş serişdeleriniň üç görnüşi bazal mediýa, serum serişdesiniň azalmagy we serumsyz mediýa bolup, serumu doldurmak üçin dürli talaplar bar.
2.1.1 Esasy gurşaw
Gibco öýjük medeniýeti
Öýjük çyzyklarynyň köpüsi aminokislotalary, witaminleri, organiki däl duzlary we uglerod çeşmelerini (glýukoza ýaly) öz içine alýan esasy metbugatda gowy ösýär, ýöne bu esasy media formulalary serum bilen doldurylmalydyr.
2.1.2 Serum serişdesiniň azalmagy
Gibco pes serumly çüýşe
Öýjük medeniýeti synaglarynda serumyň ýaramaz täsirini azaltmak üçin başga bir strategiýa, serum azaldylýan serişdäni ulanmakdyr.Zeriniň azalmagy, zerur iýmit mukdaryny azaldyp bilýän ýokumly maddalara we haýwanlardan emele gelýän faktorlara baý esasy orta formuladyr.
2.1.3 Serumsyz gurşaw
Gibco serumsyz gurşawly çüýşe
Serumsyz gurşaw (SFM), serumy degişli iýmitleniş we gormon formulalary bilen çalşyp, haýwan seriýasynyň ulanylmagyny aýlanýar.Köp başlangyç medeniýetlerde we öýjük çyzyklarynda Hytaýyň Hamster ýumurtgasy (CHO) rekombinant belok öndürmek liniýasy, dürli gibridoma öýjük liniýalary, Sf9 we Sf21 mör-möjek çyzyklary (Spodoptera frugiperda), şeýle hem wirus öndürmek üçin öý eýesi üçin serumsyz orta formulalar bar. .Aşakdaky tablisada serumsyz mediýanyň artykmaçlyklary we kemçilikleri sanalandyr.
Üstünlik
Aýdyňlygy ýokarlandyrmak
Has yzygiderli öndürijilik
Arassalamak we aşaky akymlary gaýtadan işlemek
Öýjükleriň işine takyk baha beriň
Önümçiligi ýokarlandyrmak
Fiziologiki reaksiýalara has gowy gözegçilik etmek
Öýjükli mediýany anyklamak
Adetmezçiligi
Öýjük görnüşi orta formulanyň talaplary
Has ýokary reagent arassalygy gerek
Ösüşiň haýallygy
2.2.1 pH derejesi
Süýdemdirijileriň adaty öýjük çyzyklarynyň köpüsi pH 7.4-de gowy ösýär we dürli öýjük çyzyklarynyň arasyndaky tapawutlar az.Şeýle-de bolsa, käbir üýtgedilen öýjük çyzyklary birneme kislotaly gurşawda (pH 7.0 - 7.4) has gowy ösýändigi görkezildi, käbir adaty fibroblast öýjük çyzyklary birneme aşgar gurşawyny (pH 7.4 - 7.7) has gowy görýär.Sf9 we Sf21 ýaly mör-möjek öýjük çyzyklary pH 6.2-de iň oňat ösýär.
2.2.2 CO2 derejesi
Ösüş serişdesi medeniýetiň pH-sine gözegçilik edýär we pH üýtgemelerine garşy durmak üçin medeniýetdäki öýjükleri buferleýär.Adatça, buferlemek organiki (mysal üçin, HEPES) ýa-da CO2-bikarbonat esasly buferleri öz içine almak bilen gazanylýar.Orta serişdäniň pH erän kömürturşy gazynyň (CO2) we bikarbonatyň (HCO3-) näzik deňagramlylygyna baglydygy sebäpli, atmosferadaky CO2 üýtgemegi gurşawyň pH-ni üýtgeder.Şonuň üçin, CO2-bikarbonat esasly bufer bilen buferlenen orta ulanylanda, ekzogen CO2 ulanmaly, esasanam açyk medeni tagamlarda öýjükleri ösdürip ýetişdireniňizde ýa-da ýokary konsentrasiýalarda üýtgedilen öýjük çyzyklaryny ösdüreniňizde.Gözlegçileriň köpüsi adatça howada 5-7% CO2 ulanýandyklaryna garamazdan, öýjük medeniýeti synaglarynyň köpüsinde adatça 4-10% CO2 ulanylýar.Şeýle-de bolsa, dogry pH we osmotik basyşy gazanmak üçin her gurşawda maslahat berilýän CO2 dartyş we bikarbonat konsentrasiýasy bar;has giňişleýin maglumat üçin orta öndürijiniň görkezmelerine serediň.
2.3 Plastmassa ösdürip ýetişdirmek
Öýjük medeniýeti plastmassalary, dürli öýjük medeniýeti üçin dürli görnüşlerde, ululykda we ýüzlerde bar.Öýjük medeniýeti üçin amatly plastmassany saýlamaga kömek etmek üçin aşakdaky öýjük medeniýeti plastmassa ýüzleý gollanmasyny we öýjük medeniýeti konteýner gollanmasyny ulanyň.
Termo Scientific Nunc öýjük medeniýeti plastmassalarynyň hemmesini görüň (mahabat baglanyşygy)
2.4 Temperatura
Öýjük medeniýeti üçin iň amatly temperatura, köp derejede öýjükleriň izolirlenen öý eýesiniň beden temperaturasyna we az derejede temperaturanyň anatomiki üýtgemegine baglydyr (mysal üçin deriniň temperaturasy skelet myşsasynyňkydan pes bolup biler) ).Öýjük medeniýeti üçin aşa gyzmak, aşa gyzmakdan has çynlakaý mesele.Şonuň üçin inkubatordaky temperatura adatça optimal temperaturadan birneme pes bolýar.
2.4.1 Dürli öýjük çyzyklary üçin iň amatly temperatura
Adam we süýdemdiriji öýjük çyzyklarynyň köpüsi optimal ösmek üçin 36 ° C-den 37 ° C-e çenli saklanýar.
Mör-möjek öýjükleri optimal ösmek üçin 27 ° C-de ösdürilip ýetişdirilýär;pes temperaturada we 27 ° C bilen 30 ° C arasynda has haýal ösýärler.30 ° C-den ýokary, mör-möjek öýjükleriniň ýaşaýyş güýji peselýär, 27 ° C-e gaýdyp gelse-de, öýjükler dikelmez.
Iň ýokary ösüşe ýetmek üçin guş öýjük setirlerine 38.5 ° C gerek.Bu öýjükleri 37 ° C-de saklap bilse-de, has haýal öser.
Sowuk ganly haýwanlardan alnan öýjük çyzyklary (ýerde-suwda ýaşaýanlar, sowuk suwly balyklar) 15 ° C-den 26 ° C çenli giň temperatura çydam edip biler.
Iş wagty: Fewral-01-2023